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PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒

 发布时间:2017-01-18 点击量:144

YY20126

 PicoGreenDNA荧光定量测定试剂盒

品说明书

 

主要用途

 

PicoGreenDNA荧光定量测定试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来定量样品中DNA含量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,高度敏感。

技术背景

作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地样品中双链DNA结合,产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧光单位(RFU)的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation)低,不受样品化学成分的干扰。

产品内容

染色液(Reagent A)

62.5微升

稀释液(Reagent B)

15毫升

标准液(Reagent C)

1毫升

说明书

 1份

 

保存方式

 

保存染色液Reagent A)和标准液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照有效保证6

 

用户自备

 

15毫升离心管:用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板:用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析

 

实验步骤

 

  • 测定准备

 

  • 准备好待测样品,置于冰槽里
  • 设定好荧光分光光度仪(温度为37℃):激发波长480nm,散发波长530nm,并置零 
  • 实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出xx毫升稀释液(Reagent B)到新的15毫升离心管,加入25微升染色液(Reagent A),混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液,放在暗室里。然后进行下列操作。

 

  • 构建标准曲线

 

  • 准备好51.5毫升离心管,标记为15号管
  • 分别加入500微升稀释液(Reagent B)到每个离心管
  • 移取500微升标准液(Reagent C)到1号管,混匀
  • 小心移取500微升1号管稀释的标准液(Reagent C)到2号管,混匀
  • 小心移取500微升2号管稀释的标准液(Reagent C)到3号管,混匀
  • 小心移取500微升3号管稀释的标准液(Reagent C)到4号管,混匀
  • 15号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表

 

管号

缓冲液(Reagent B

标准液(Reagent C

标准DNA总量

1

500微升

500微升

1微克

2

500微升

500微升1号管

0.5

3

500微升

500微升2号管

0.25

4

500微升

500微升3号管

0.125

5

500微升

空对照

0

 

  • 移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液新的比色皿
  • 加入500微升上述配制的标准液
  • 室温下,孵育5分钟,避免光照
  • 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
  • 重复实验步骤8至11四次
  • 绘制标准曲线:纵座标(Y轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X轴)为DNA含量(微克)

 

  • 样品检测

 

  • 移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液新的比色皿
  • 加入500微升待测样品
  • 室温下,孵育5分钟,避免光照
  • 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
  • 根据标准曲线获得样品对应DNA含量微克
  • 样品实际DNA浓度:

 

 

注意事项

 

  • 本产品为20次(比色皿和100次(96孔板)操作,包括标准曲线测定
  • 操作时,须戴手套
  • 使用新鲜配制的染色工作液,务必不要超过2小时,且注意避光
  • 建议使用塑料管配制染色工作液,而不是玻璃制品
  • 孵育时,避免光照
  • 系统检测,标准曲线测定1次即可;如果仪更换,则需要重新测定1次
  • 如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量
  • 可以使用荧光酶标仪检测,试剂用量和体系均除以5,包括标准DNA含量,其计算公式

 

[根据标准曲线获得样品对应DNA浓度(微克X样品稀释倍数0.1(样品容量;毫升)微克/毫升

 

  • 盐类、尿素、乙醇、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNA和RNA不会干扰检测
  • 本公司提供系列DNA检测试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定高度敏感