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大肠杆菌LB培养基的介绍及配置

 发布时间:2017-02-06 点击量:2653

                 大肠杆菌LB培养基的介绍及配置

一般大肠杆菌都运用LB 培养基,

其成分如下:

  胰化蛋白胨 10g/L 酵母提取物 5g/L

  NaCl 10g/L

如果是固体的培养基,就需要再参加15克琼脂粉

  pH 7.4~7.6

试验室里,配好以后就去灭菌锅里灭菌就好了。

 

LB培养基是一种使用广泛和一般的细菌基础培养基,有时又称为一般培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其间酵母提取物为微生物供给碳源和动力,磷酸盐、蛋白胨首要供给氮源,而NaCl供给无机盐。

在制造固体培养基时还要参加一定量琼脂作凝结剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实践使用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,避免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝结,一般不被微生物分解使用。固体培养基中琼脂的含量依据琼脂的质量和气温的不一样而有所不一样。

 

1. LB培养基配制: (液体培养基) ① 取1L的烧杯,加入适量的一蒸水(<1000ml),称取胰蛋白胨 10g , 酵母提取物 5g , Nacl 10 g 倒入烧杯中  ② 加入磁子搅拌,至完全溶解 ③ 用NaoH调PH=7.0,定容至1L ④ 分装后高压蒸汽灭菌 (固体培养基) ① 在液体培养基的基础上加入琼脂糖:1L液体培养基→15g琼脂糖(用水先溶解) ② 在电炉子上边加热边搅拌至煮沸溶解 ③ 分装后高压灭菌 注意事项:  ① 电炉子温度不要太高,烧杯直接加热时电炉子上要加石棉网 高压灭菌时,瓶盖上要插上针头,防止灭菌时瓶盖喷出 2. 倒平板:  培养皿要提前进行灭菌、烘干,在超净工作台里,打开酒精灯,在酒精灯的火焰旁进行操作,倒完后做好标记  3. 接种(平板划线分离法):接种环挑取大肠杆菌进行接种

大肠杆菌的培养    1. LB培养基配制: (液体培养基) ① 取1L的烧杯,加入适量的一蒸水(<1000ml),称取胰蛋白胨 10g , 酵母提取物 5g , Nacl 10 g 倒入烧杯中  ② 加入磁子搅拌,至完全溶解 ③ 用NaoH调PH=7.0,定容至1L ④ 分装后高压蒸汽灭菌 (固体培养基) ① 在液体培养基的基础上加入琼脂糖:1L液体培养基→15g琼脂糖(用水先溶解) ② 在电炉子上边加热边搅拌至煮沸溶解 ③ 分装后高压灭菌 注意事项:  ① 电炉子温度不要太高,烧杯直接加热时电炉子上要加石棉网 高压灭菌时,瓶盖上要插上针头,防止灭菌时瓶盖喷出 2. 倒平板:  培养皿要提前进行灭菌、烘干,在超净工作台里,打开酒精灯,在酒精灯的火焰旁进行操作,倒完后做好标记  3. 接种(平板划线分离法):  接种环挑取大肠杆菌进行接种:

注意:每次划线前接种环都要灼烧灭菌,再冷却。

4. 37°恒温培养箱培养:  接种好的培养皿正置15分钟,然后倒置放入培养箱培养