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细胞培养病毒污染溶斑法中性红染色试剂盒产品说明书

 发布时间:2017-03-30 点击量:374

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细胞培养病毒污染溶斑法中性红染色试剂盒产品说明书
主要用途
细胞培养病毒污染溶斑法中性红染色试剂是一种旨在通过半固体生长环境,观察病毒感染细胞产生的细胞
病理效应(CPE)以及溶斑形成的潜力(plaque-forming-unit),进行定性分析病毒污染程度的而经典的
技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞培养中病毒污染的定性
检测,尤其适宜于肠道病毒的污染检测。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,操作简便,重复一致。
技术背景
细胞培养中的主要微生物污染包括支原体(mycoplasma)、细菌、真菌、酵母和病毒等,其中病毒污染则难
以观察和发现。细胞培养病毒污染溶斑法中性红染色技术,是通过溶斑形成并着色,进行定性分析病毒污
染的状况。溶斑(Plaque)是病毒感染后,单细胞层生长时,细胞周围出现的细胞病理效应(cytopathic effect):
即在显微镜下可见细胞呈现深色圆形,或肉眼可见浅色发白的区域,其中心由于病毒诱导所致细胞溶解,
而导致细胞缺失。通过中性红染色,呈现浅红色透明区。
产品内容
培养液(Reagent A) 毫升
固养液(Reagent B) 毫升
染色液(Reagent C) 毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存在4℃的冰箱里,染色液(Reagent C),避免光照,有效保证6 月
用户自备
6 孔细胞培养板:用于细胞铺板培养
恒温水浴:用于预热和保温培养工作液
50 毫升锥形离心管:用于配制工作液的容器
2 毫升离心管:用于稀释病毒悬液的容器
涡旋震荡器:用于病毒稀释的混匀
微波炉:用于融化半固体培养液
倒置显微镜:用于观察感染细胞
二氧化碳细胞培养箱:用于感染细胞的孵育
实验步骤
一、细胞准备
1. 准备1 个6 孔细胞培养板的待测细胞(1 X 106/孔)
2. 放进37℃二氧化碳细胞培养箱孵育24 小时,或直至细胞铺满率达到90%以上
3. 取出培养液(Reagent A),置于37℃恒温水浴预热
4. 取出固养液(Reagent B),置于微波炉里加热溶化(注意:避免溢出)
5. 放进50℃恒温水浴孵育15 分钟
6. 移出xx 毫升预热的培养液(Reagent A)到37℃预热的50 毫升锥形离心管
7. 移出xx 毫升固养液(Reagent B)到50 毫升锥形离心管
8. 轻度涡旋震荡或用手摇动锥形离心管,充分混匀(培养工作液)
9. 置于37℃恒温水浴(注意:参见注意事项9)
10.小心抽去6 孔细胞培养板里的培养液
11.快速度分别移取xx 毫升含有培养液(Reagent A)和固养液(Reagent B)的培养工作液到6 孔细胞
培养板的每一孔里(每孔2 毫升)
12.用手轻轻摇动,铺满整个底面,避免气泡产生
13.置于室温下至少30 分钟,使胶体凝固
14.放进37℃二氧化碳细胞培养箱孵育5 天(注意:参见注意事项10)
二、染色
1. 取出染色液(Reagent C),置于37℃恒温水浴预热,避免光照
2. 取出固养液(Reagent B),置于微波炉里加热溶化(注意:避免溢出)
3. 放进50℃恒温水浴孵育15 分钟
4. 移出xx 毫升预热的染色液(Reagent C)到37℃预热的50 毫升锥形离心管
5. 移出xx 毫升固养液(Reagent B)到50 毫升锥形离心管
6. 轻度涡旋震荡或用手摇动锥形离心管,充分混匀(染色工作液)
7. 快速度分别移取xx 毫升含有染色液(Reagent C)和固养液(Reagent B)的染色工作液到6 孔细胞
培养板的每一孔里(每孔2 毫升)
8. 用手轻轻摇动,铺满整个底面,避免气泡产生
9. 置于室温下至少30 分钟,使胶体凝固
10.放进37℃二氧化碳细胞培养箱孵育6 小时(注意:参见注意事项10 和11)
11.在倒置显微镜下观察和计数溶斑:浅红色透明区
注意事项
1. 本产品为20 次(3 个6 孔细胞培养板)操作
2. 本产品适宜于肠病毒,例如脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)、柯萨奇病毒疹(coxsackie virus)、艾柯病毒
(ECHO virus)、牛豆病毒(Vaccinia virus)、柯萨奇病毒疹(coxsackie virus)等
3. 用户可以根据实际操作的细胞培养瓶或细胞培养板大小,按比例调整试剂使用量
4. 所有培养操作和使用工具均须在严格无菌状态下进行
5. 操作时,须戴手套
6. 严格遵守病毒操作安全规范
7. 操作时使用的枪头须使用带滤芯的枪头
8. 细胞铺板前,避免细胞聚集成团
9. 半固体培养工作液铺板前,保持在37℃;注意温度过高会杀死细胞;温度过低则工作液凝固
10.细胞培养孵育时,培养箱须保持湿度
11.不同的细胞出现溶斑的时间会有差异;用户可以根据实际情况终止孵育,进行观察和计数
12.本公司提供系列细胞培养污染检测试剂产品。
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定无细菌和支原体污染