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干细胞成骨分化潜力比色法定量检测试剂盒产品说明书

 发布时间:2017-04-01 点击量:631

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干细胞成骨分化潜力比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
干细胞成骨分化潜力比色法定量检测试剂是一种旨在通过鳌和技术,使钙离子和茜素红S 产生复合物,显
示橘红色,在分光光度仪上进行比色测定,以分析成骨细胞分化和骨组织形成程度的而经典的技术方
法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物干细胞的成骨细胞分化程度分析。
产品严格无菌,即到即用,性能稳定,着色清晰。
技术背景
间质干细胞(mesenchymal stem cell)分化产生脂肪细胞(adipocyte)、成骨细胞(osteoblast)、肌细胞(myocyte
和软骨细胞(chondrocyte)。成骨细胞(osteoblast)是特定的成纤维细胞,分泌和矿物化骨基质。矿物化的
细胞外基质由I型胶原蛋白、骨钙素(osteocalcin)、基质gla蛋白(matrix gla protein)、骨桥蛋白(osteopontin)、
骨涎蛋白( bone sialoprotein)、BMP、TGF-β、羟基磷灰石(hydroxyapatite)等组成。成骨细胞的分化分成
三个阶段:细胞繁殖、基质成熟、基质矿物化。其中矿物化完成的标志为钙沉积,表明骨形成。茜素红
(ALIZARIN RED S)是一种蒽醌(anthraquinone)衍生物:9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单
钠盐(9,10-Dihydro-3,4-dihydroxy-9,10-dioxo-2-anthracenesulfonic acid sodium salt),又称媒介红3(Mordant
Red 3)或茜素磺酸钠(Sodium alizarinesulfonate)。其分子式为C14H7NaO7S,分子量为342.25。茜素红和钙
离子以鳌和方式形成复合物,用以识别成骨细胞的成熟和骨形成。通过茜素红染色,产生桔红色沉积。在
分光光度仪或酶标仪上(562nm波长)进行测定,来定量分析成骨细胞分化和骨组织形成的程度。
产品内容
清理液(Reagent A) 20 毫升
固着液(Reagent B) 20 毫升
净化液(Reagent C) 20 毫升
染色液(Reagent D) 10 毫升
溶解液(Reagent E) 5 毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存染色液(Reagent D)在4℃冰箱里,其余的保存在室温下;确保瓶盖密闭。染色液(Reagent D),避
免光照;有效保证6 月
用户自备
显微镜:用于观察细胞染色
平式摇荡仪:用于染色萃取的混匀
比色皿或多孔板:用于比色分析的容器
分光光度仪或酶标仪:用于定量检测成骨细胞
实验步骤
1. 小心抽掉多孔细胞培养板里的培养液
2. 轻轻加入适量的清理液(Reagent A)到每个培养孔里(见下表)
3. 小心抽去清理液
4. 小心加入适量的-20℃预冷的固着液(Reagent B)到每个培养孔里(见实验步骤2 表)
5. 在-20℃冰箱里孵育60 分钟
6. 小心抽去固着液
7. 小心加入适量的净化液(Reagent C)到每个培养孔里(见实验步骤2 表)
8. 小心抽去净化液
9. 小心加入适量的染色液(Reagent D)到每个培养孔里(见下表)
10.在室温下静置10 分钟
11.小心抽去染色液
12.小心加入适量的净化液(Reagent C)到每个培养孔里(见实验步骤2 表)
13.小心抽去净化液
14.重复实验步骤12 和13 二次,或净化液不再显示红色
15.(选择步骤)置于一般光学显微镜下观察染色:成骨细胞呈现橘红色
16.小心加入适量的溶解液(Reagent E)(见下表)
17.轻轻摇动培养板,直到溶解液(Reagent E)均匀分布
18.置于平式摇荡仪,在室温下,孵育15 分钟,速度为50RPM
19.(选择步骤)移入到比色皿
20.即刻放进分光光度仪或酶标仪测读,波长为562 nm
21.构建成骨细胞定量曲线:横座标(x 轴)为细胞浓度(细胞量);纵坐标(y 轴)为样品读数(吸光单
位OD 值)
注意事项
1. 本产品为20 次(24 孔板)、50 次(48 孔板)、100 次(96 孔板)操作
2. 操作时须戴手套
3. 试剂瓶务必密封保存
4. 染色时,避免光照
5. 细胞染色前后的清洗过程中,小心操作,以免将细胞冲洗掉,而影响定量分析
6. 本公司提供系列干细胞分化检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定着色清晰