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动物细胞/组织线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书

 发布时间:2017-09-29 点击量:270

主要用途

动物细胞/组织线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过物理或化学破膜及离心处理方法,从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器,然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种动物软组织(肝或脑组织)和培养细胞的线粒体核酸成分的分离。用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR分析等。产品即到即用,操作简易,性能稳定,无核酶污染,萃取纯度和产量皆高。

技术背景

线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的重要的课题之一。线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。线粒体DNA的分离和定量以及突变分析是研究中必不可少的。

用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液(12028)或PBS缓冲溶液(12033):用于清理细胞样品
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(12024):用于细胞脱离
完全细胞培养液(12052):用于细胞处理所需的培养基
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
50毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
涡旋震荡仪:用于混匀
4℃(微型)台式离心机:用于样品操作
4℃超速离心机:用于样品操作
DOUNCE匀浆器:用于裂解细胞
58℃恒温水槽:用于孵育反应物

注意事项

1.本产品为10次(1克动物组织或5 X 107细胞)操作
2.操作时,须戴手套
3.所有操作均须无菌状态下进行,避免污染母液,尤其是裂解液(Reagent B)和保存液(Reagent E)
4.线粒体操作均须在4℃或以下状态进行
5.建议使用足够的样品量
6.建议严格控制操作时间
7.通常匀化次数为20至40下(或细胞颗粒群/组织块状消失为止)达到80%的细胞裂解为理想状态,但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度:完整细胞呈现发亮的圆环。低于50%可以增加匀化次数
8.通常孵育5分钟(不宜超过5分钟)达到80%的细胞裂解为理想状态,但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度:完整细胞呈现发亮的圆环。低于50%可以增加孵育时间和涡旋震荡次数
9.对于难以裂解的细胞或组织,采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理
10.试剂中的溶液使用前摇匀;酶解液(Reagent H)需放进37℃温育少许;为避免反复冻融,建议适量分装
11.通常1克动物组织或5 X 107细胞的线粒体含量为50微克线粒体蛋白
12.可以通过增加线粒体溶解时间(30分钟)和酶解时间(直至16小时),获得大量的DNA产量
13.通常1克动物组织或5 X 107细胞中提取的线粒体DNA达10至20微克
14.本产品所获得的线粒体DNA纯度和产量为理想,确保无核DNA和外源性DNA污染
15.本公司提供系列线粒体技术产品 


质量标准

1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定无核酶污染
3.本产品经鉴定萃取产量和纯化程度高
4.本产品经鉴定无基因组DNA污染