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电转感受态细菌DH10B细胞产品说明书

 发布时间:2017-11-27 点击量:357

主要用途

 电转感受态细菌DH10B细胞是一种通过甘油溶液制备的,耐受电击刺激,快速吸收DNA的特定状态的常用大肠杆菌细胞。其适宜于原核或真核生物基因组DNA导入、大质粒转染、噬菌体表面展示技术、重组DNA实验等。产品即到即用,性能稳定,操作方便,电转状态恒定,转染效率高,可达1 X 109转化菌/微克pUC19。

技术背景

细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。电转感受态细菌DH10B细胞是通过电休克而不是热休克的简便快速的技术方法。其基因型为F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC)80lacZ M15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara,leu)7697 galU galK  -rpsL nupG ,可以在Bluo-gal或X-gal琼脂平板上进行蓝白斑筛选;其含有recA1和endA1突变,而确保质粒中外源基因片断插入稳定,改善质粒DNA提取的质量。其转化效率可达1.0 X 109转化菌/微克pUC19。

用户自备

SOC培养液:用于转化菌的复苏培养(12002)
琼脂平板:用于转化菌的筛选
电穿孔仪:用于转化电击
恒温摇床:用于转化细菌的复苏培养


注意事项

1.本产品为总量0.5毫升规格,严格保存在-70℃冰箱里
2.操作时,须戴手套
3.操作时,注意安全
4.文库构建,建议使用 电转超级感受态细菌DH10B细胞— 12030.4
5.未用完的感受态细胞,即刻放回-70℃冰箱保存
6.每冻融1次,转染效率下降2倍
7.建议转染后,使用SOC培养液复苏培养,否则转染效率2至3倍下降
8.建议使用纯化的不含盐离子的DNA,至关重要
9.建议使用Bio-Rad GenePulserII电穿孔仪
10.使用pUC19对照培养板计算转化效率(CFU/微克):
【CFU(对照组)皮克pUC19】X 【1 X 106皮克/微克 X(细菌总容量,毫升铺板容量,毫升) X 稀释倍数】
例如:10皮克pUC19,1毫升菌量,1:100稀释,铺板50微升,产生50菌落:
CFU/微克=【50CFU10皮克】 X【1 X 106皮克/微克 X (10.05)X100】=1.0 X 1010

11.本公司提供系列感受态菌产品

质量标准
1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定转染效率高