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真菌格莫瑞六亚试剂盒实用步骤流程

 发布时间:2019-11-11 点击量:201

60067.1 v.A

 

真菌格莫瑞六亚甲基四胺(Gomori's Methenamine Silver;)银染试剂盒

产品说明书

 

主要用途

 

真菌格莫瑞六亚甲基四胺(Gomori's Methenamine Silver;)银染试剂是一种旨在使用银离子的醛基还原反应技术,识别各种涂片或存档中的石蜡包埋组织切片中棕黑色染色的真菌细胞的而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统格莫瑞(Gomori)方法、成功实验证明的。广泛用于各种真菌菌株(例如aspergillosis和pneumocystis)的染色等。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,显色清晰。

 

技术背景

 

真菌的细胞壁含有粘多糖(mucopolyssachride)成分,氧化后,释放出醛基(aldehyde group),与银离子反应,使银离子还原为黑色金属银,产生金黄色的背景下,棕黑色的真菌细胞。  

 

产品内容

 

清理液(Reagent A)         200毫升

固着液(Reagent B)          10毫升

氧化液(Reagent C)          25毫升

强化液(Reagent D)            10毫升

染色液(Reagent E)               25毫升

置换液(Reagent F)          10毫升

稳定液(Reagent G)          10毫升 

产品说明书    1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里;染色液(Reagent E)避免光照;氧化液(Reagent C)具有腐蚀性,注意操作安全;有效保证3月

 

用户自备

 

恒温培养箱或恒温水槽:用于样品反应孵育

盖玻片:用于切片封片

中性树脂:用于切片封片

光学显微镜:用于切片染色后观察分析

 

 

 

实验步骤

 

1.准备好真菌涂片或4微米厚的石蜡切片脱蜡处理

2.小心加上200微升清理液(Reagent A)在切片上,铺满整个切片样品表面

3.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

4.小心加上200微升固着液(Reagent B)在切片上,铺满整个切片样品表面

5.室温下孵育15分钟

6.小心移去切片上的固着液(Reagent B)

7.小心加上200微升清理液(Reagent A)在切片上,铺满整个切片样品表面

8.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

9.小心加上500微升氧化液(Reagent C)在切片上,铺满整个切片样品表面

10.室温下孵育60分钟

11.小心移去切片上的氧化液(Reagent C)

12.小心加上200微升清理液(Reagent A)在切片上,铺满整个切片样品表面

13.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

14.重复实验步骤12至13二次

15.小心加上500微升强化液(Reagent D)在切片上,铺满整个切片样品表面

16.室温下孵育1分钟

17.小心移去切片上的强化液(Reagent D)

18.小心加上200微升清理液(Reagent A)在切片上,铺满整个切片样品表面

19.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

20.重复实验步骤18至19二次

21.小心加入500微升染色液(Reagent E)在切片上,铺满整个切片样品表面

22.放进50℃恒温培养箱孵育60分钟,或直至出现棕色(注意:避免干枯)

23.小心移去染色液(Reagent E)

24.小心加上200微升清理液(Reagent A)在切片上,铺满整个切片样品表面

25.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

26.重复实验步骤24至25二次

27.小心加上200微升置换液(Reagent F)在切片上,铺满整个切片样品表面

28.室温下孵育1分钟,或直至出现灰色

29.小心移去切片上的置换液(Reagent F)

30.小心加上200微升清理液(Reagent A)在切片上,铺满整个切片样品表面

31.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

32.重复实验步骤30至31二次

33.小心加入200微升稳定液(Reagent G)在切片上,铺满整个切片样品表面

34.室温下孵育3分钟 

35.小心移去稳定液(Reagent G)

36.小心加入200微升清理液(Reagent A)在切片上,铺满整个切片样品表面

37.小心移去切片上的清理液(Reagent A)

38.重复实验步骤36至37一次

39.(选择步骤)复染处理 (建议使用淡绿(LIGHT GREEN)复染试剂盒——80091)

40.即刻放上盖玻片或封片(中性树脂)

41.在一般光学显微镜下观察:

真菌――呈现棕黑色或黑色

粘蛋白——玫瑰红

背景――呈现绿色(复染)

 

注意事项

 

1.本产品为50次操作

2.操作时,须戴手套

3.氧化液(Reagent D)具有腐蚀性,注意操作安全

4.氧化液(Reagent D)出现明显棕色,须更换后使用

5.每次更换试剂溶液时,保持切片面基本晾干

6.试剂溶液在切片表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满切片表面

7.整个操作,在避光状态下进行

8.染色完成后,即刻进行光学显微镜观察 

9.样品染色后保存,避免光照

10.染色容易过度,注意观察背景颜色,控制操作时间

11.本公司提供系列微生物染色试剂产品

 

质量标准

 

1.本产品经鉴定性能稳定

2.本产品经鉴定显色清晰