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内毒素检测鲎试剂盒 (微板定量显色基质法)使用说明书

 发布时间:2020-12-04 点击量:116

内毒素检测鲎试剂盒 (微板定量显色基质法)使用说明书
【检测限】
【用途】
【原理】
【贮存】2~8℃,避光贮存。
【用法】
【试剂盒组成】
表1 内毒素标准溶液配制
表2 内毒素标准溶液配制
0.1 0.25 0.5 1 内毒素浓度(EU/ml)
0.6 0.5 0 加细菌内毒素检查用水(ml) 1.8
0.2 0.2 0.5 1 加1EU/ml内毒素溶液(ml)
0.01 0.025 0.05 0.1 内毒素浓度(EU/ml)
0.9 0.6 0.5 0 加细菌内毒素检查用水(ml)
0.1 0.2 0.5 1 加0.1EU/ml内毒素溶液(ml)
显色基质鲎试剂(End-point Chromogenic Tachypleus Amebocyte 
Lysate,EC TAL)用于体外细菌内毒素的定量检测,禁止以任何途径进
入机体。 
鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂
中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下
(温度,pH值及无干扰物质),细菌内毒素激活C 因子,引起一系列酶
促反应,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的显色基质,
使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺(pNA,λ =405nm)。在一定
时间内,pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关,据此,可以定量供
试品的内毒素浓度。
1 . 材料和设备
1.1 试剂(试剂盒配套)
鲎试剂、细菌内毒素工作标准品、显色基质、反应终止剂、细菌内毒素
检查用水。
1.2 器材
试剂盒配套:
无热原96孔板(MPC96)、微板架。
鲎试剂、细菌内毒素工作标准品、显色基质、反应终止剂、细菌内毒素
检查用水
2. 供试品的预处理及注意事项
2.1 供试品与鲎试剂混合后的溶液的pH值应在6.0~8.0之间,若超出此
范围,需用无热原缓冲液、0.1N氢氧化钠或0.1N盐酸调节。
2.2 若供试品中可能存在鲎试验的干扰物质,处理参见【供试品的干扰
试验】。
2.3 若供试品中可能含有β-葡聚糖(β-葡聚糖会产生G因子旁路反
应,干扰内毒素检测),需选用特异性鲎试剂(我司提供)。
3. 实验操作
3.1 细菌内毒素标准溶液配制
标准曲线所采用的内毒素浓度可以为0.01,0.025,0.05,0.1EU/ml或
0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml。稀释方法如下:取细菌内毒素工作标准品1
瓶,加入1ml细菌内毒素检查用水,置旋涡混匀器上剧烈振摇15分钟
(振摇过程不得溅出!)。将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查
用水稀释为10EU/ml的内毒素溶液,再稀释为1.0EU/ml的内毒素溶液。
以15EU/瓶为例:
(注:横线上方为加入作为母液的内毒素溶液的量,下方为加
入细菌内毒素检查用水的量)
 0.8ml CSE 0.2ml CSE
15EU/瓶 15EU/ml 10EU/ml 1EU/ml
 1ml TRW 0.4ml TRW 1.8ml TRW
以1.0EU/ml的内毒素溶液为母液按表1稀释成0.1,0.25,0.5,1.0 
EU/ml的浓度梯度或以0.1EU/ml的内毒素溶液为母液按表2稀释成0.01,
0.025,0.05,0.1EU/ml的浓度梯度。每稀释一步均应在旋涡混匀器上
剧烈振摇至少30秒。稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟,用前需在
旋涡混匀器上剧烈振摇1分钟,配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用
完。
1 2
max
EC64405:检测区间为 0.1EU/ml~1.0EU/ml;
EC64405S:检测区间为0.1EU/ml~1.0EU/ml或0.01EU/ml~0.1EU/ml
EC64405SS:检测区间为0.1EU/ml~1.0EU/ml或0.01EU/ml~0.1EU/ml