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如何正确的选择一抗?本篇告诉你

 发布时间:2021-08-17 点击量:57
  一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第一抗体就是平常所说的抗体,即能和抗原特异性结合。
 
  接下来让我们一起来了解一下一抗的选择方法吧。
 
  (1)确定实验样本的种属
 
  确定自己实验所用样本的种属,如human、rat、mouse、pig、goat等。应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高。
 
  如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过。
 
  可以通过序列比对的方法来预测交叉反应,可应用Expasy和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。如果比对结果,证明同源性比较高的,也可以选择。
 
  (2)确定实验类型
 
  确定自己的实验类型,如WB、IHC、ICC、ELISA、FCM分析等,一般抗体说明书会列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如未提及并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证。如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
 
  (3)分析样本蛋白的结构性质
 
  分析了解样本蛋白的结构性质有助于选择合适的抗体,抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FCM流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
 
  (4)抗体宿主物种的选择
 
  一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,而是选兔源的一抗,二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大。